培养基生产,制备培养基的基本步骤是什么?

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本文目录

一、制备培养基的基本步骤是什么?

1.配制溶液


将部分所需量的水加入容器中,根据培养基配方称量各种原料,加入使其溶解,最后补足所需的水。蛋白胨、肉酱等物质需要加热溶解。加热过程中蒸发的水分应待原料全部溶解后加水补充。


配制固体培养基时,先将上面配制好的液体培养基煮沸,然后加入称好的琼脂,继续加热至完全融化。不断搅拌以防止琼脂糊烧焦。


2.调节pH值


使用pH试纸测试培养基的pH值。若不符合要求,则用10HCl或10NaOH调节,直至达到配方要求的pH值。


3.过滤


趁热用滤纸、纱布或棉花过滤配制好的培养基。用纱布过滤时,最好折叠成六层。用滤纸过滤时,将滤纸折叠成筋状,平放在漏斗上过滤。


4.包装


过滤后的介质应等分。如果要制作倾斜培养基,必须将培养基分装到中。如果要制备平板培养基或液体或半固体培养基,必须将培养基分配到锥形瓶中。


分装时,一手松开弹簧夹,让培养基流出,另一只手握住几支或锥形瓶,依次接收培养基。分装时注意不要让培养基粘在管或瓶口,以免棉塞浸湿,造成杂菌污染。


装入中的培养基量取决于和锥形瓶的尺寸和需要。一般制作斜面培养基时,每个15150毫米应盛装约34毫升。如果制作深培养基,每个20220毫米应装满约12至15毫升。每个锥形瓶中填充的培养基通常是其体积的一半。


5.添加卫生棉条


分装完毕后,需要用棉塞塞住管口或瓶口。卫生棉条的主要用途是过滤空气并避免污染。卫生棉条应由普通新鲜、干燥的棉制成。请勿使用脱脂棉,以免吸收水分而导致卫生棉条无法使用。


制作卫生棉条时,根据卫生棉条的大小,将棉花铺成适当的厚度,取一块手掌大小的,铺在左手拇指和食指形成的圆孔中。紧紧握住它,就会形成一个长杆状的卫生棉条。


卫生棉条制成后,应快速插入管或瓶口。卫生棉条应紧贴内壁,不留任何缝隙,防止空气中的微生物沿着皱纹侵入。卫生棉条不应太紧或太松。插入卫生棉条后,宜搬运卫生棉条、管子、瓶子,以免掉落。卫生棉条的2/3应该在管子或瓶子里,顶部露出一点棉花,以便于取出。塞好棉塞的和锥形瓶应盖上厚纸,并用细绳扎紧,准备灭菌。


6、制作斜培养基和平培养基


培养基灭菌后,斜面培养基和平培养基的配制必须在培养基未凝固的情况下进行。


-1。制作倾斜培养基。在实验台上放置一条长约0-5至1米、厚约1厘米的木条。将头放在木棒上,让管内的培养基自然倾斜。凝固后即成为斜坡培养基。


-2。准备平板培养基。将新灭菌的锥形瓶和装有培养基的培养皿放在实验台上,点燃酒精灯,右手握住锥形瓶底部,左手取下棉塞,握住瓶口稍微放在酒精灯上。加烧,左手打开培养皿盖子,右手快速将培养基倒入培养皿中。将约10毫升倒入每个盘子中,直至覆盖盘子底部。


放入培养基并放置约15分钟。待培养基凝固后,将5个培养皿叠放,翻转过来,平放在培养箱中。24小时后检查。如果培养基不生长任何细菌,则可以使用。培养微生物。


二、如何配制乳培养基?

乳培养基的制备步骤如下1、准备材料鲜牛奶、琼脂、蔗糖或葡萄糖、菌株。2-将适量鲜牛奶倒入锅中,加热至沸腾,然后冷却至45左右。3-冷却牛奶中加入适量琼脂,搅拌均匀。4-加入适量蔗糖或葡萄糖,搅拌溶解均匀。5-将搅拌均匀的液体培养基倒入培养皿中,等待其凝固。6-用所需细菌接种固化培养基的表面。7-将接种好的培养皿密封并在合适的温度下放置一段时间。8-观察细菌生长情况,根据需要调整培养时间和温度。9-根据实验需要,可根据需要添加其他营养物质。注意事项1-配制培养基时,注意操作的无菌环境,避免杂菌污染。2-切记牛奶不要过热,以免破坏其营养成分。3、温度和时间的选择应根据培养细菌的需要而定。4-使用前,检查培养基是否有异味或异常。如果是这样,请将其丢弃并避免使用。5、使用后剩余的培养基应密封保存,并在一定期限内使用,以免失效。


三、制作

磅固体培养基的步骤是什么?


步骤如下,


先准备1000ml,一般加1000ml蒸馏水,然后加入25gLB肉汤,混匀。很简单。


如果你自己准备的话,你需要的东西会更多。制备液体培养基需要1000ml蒸馏水、10g胰蛋白胨、5g酵母提取物和10g氯化钠。应该按照这个比例配置多少。


如果配置固体,则需要添加琼脂粉。1000ml中加入20g琼脂粉,使其充分凝固。


四、

制备固体培养基的步骤是什么?


010-10101、培养基配方的选择


同一培养基在不同作品中的配方往往存在一些差异。因此,除了采用标准方法并严格按照其规定配制外,一般应尽量收集相关资料,进行比较核对,然后根据自己的使用目的进行选择,并记录其来源。


2.媒体准备记录


每次配制培养基时均应保存记录,包括培养基名称、配方及其来源、各种成分的品牌、最终pH值、灭菌温度和时间、配制日期和配制者等。应制作一份记录副本。原始记录留存备查,复制记录与配制好的培养基一起保存,防止混淆。


3.培养基成分的称重


培养基的各种成分必须准确称量,并注意防止混淆。最好一次性完成,不要间断。公式可以放在一边。称量每种成分后,在配方正面做一个标记。将所有需要称量的药品一次性取出,放在左侧。每种成分称重后,将其移至右侧。完成称重后,应进行检查。


4.培养基成分的混合和溶解


培养基中使用的所有化学品均应是化学纯的。使用的煮锅一定不能是铜锅或铁锅,以免微量的铜或铁混入培养基中,使细菌难以生长。最好用不锈钢生菜加热融化。可放入大烧杯或大烧瓶中,放入高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽灭菌器中煮溶。入锅融化时,可先用温水加热,并随时搅拌,防止焦化。若发现焦化,则培养基不能使用,应重新配制。待大部分固体成分溶解后,用小火使所有成分完全溶解直至沸腾。如果琼脂溶解了,则用另一部分水溶解其他成分,然后将两种溶液充分混合。在加热和熔化过程中,由于蒸发而损失的水分最终必须得到补充。


5.培养基pH值的初步调整


由于在加热和灭菌过程中培养基的pH值会发生变化,因此应在培养基的所有成分完全溶解后初步调整pH值。例如,牛肉浸液的pH值可降低约0-2,而肠浸液的pH值会显着升高。因此,对于这一步,操作者应时刻注意探索经验,以掌握培养基的最终pH值,保证培养基的质量。调节pH后,应将培养基煮沸几分钟,以利于培养基沉淀物的沉淀。


6.培养基的过滤和澄清


液体培养基必须绝对澄清,琼脂培养基也应透明,无明显沉淀。因此,必须采用过滤或其他澄清方法来满足这一要求。一般液体培养基可以通过滤纸过滤。滤纸应折叠成扇形或漏斗形,以免因水压不均匀而导致滤纸破裂。


琼脂培养基可以趁热用干净的白色法兰绒布过滤。也可以用双层纱布,中间夹一层薄薄的脱脂棉来过滤。制作新的肉、肝、血、土豆等输液时,必须先用绒布过滤残渣,然后用滤纸反复过滤。如果过滤方法不能满足澄清要求,则必须采用蛋清澄清方法。将已冷却至55~60C的培养基放入大锥形烧瓶中。用量不应超过烧瓶容量的1/2。每1000ml培养基中加入1~2个蛋清,剧烈摇匀3~5分钟,放入高压蒸汽灭菌器中,121加热20分钟,趁热取出,过滤用法兰绒布。


7.培养基的包装


培养基应根据使用目的和要求,包装于、烧瓶等合适的容器中。份量不得超过容器容量的2/3。容器口可用内衬防潮纸的棉塞密封,也必须用防水纸包裹。点胶时最好使用半自动或电动定量点胶机。分配琼脂斜面培养基时,适量应足以形成底层的2/3和斜面的1/3。包装容器应提前清洗并干烤灭菌,以利于培养基灭菌彻底。每批培养基应分装20ml培养基装入小玻璃瓶中,与该批培养基同时灭菌,以便测定该批培养基的最终pH。


8.培养基灭菌


一般培养基可用121高压蒸汽灭菌15分钟。在各种培养基制备方法中,除非另有说明,均可采用本方法进行灭菌。


某些怕热成分,如糖,应单独制备成20或更高的浓度,通过过滤或间歇灭菌进行灭菌,然后采用技术和定量方法添加到培养基中。明胶介质也应在较低温度下灭菌。血液、体液和抗生素应通过技术提取并添加到已冷却至50左右的培养基中。


琼脂斜面培养基灭菌后应立即取出。冷却至55-60时,应放置在适当的斜坡上,等待自然凝固。


9.培养基质量检验


每批培养基配制完毕后,应仔细检查。如发现裂纹、渗水、颜色异常、棉塞被培养基污染等情况,应挑出丢弃。并测定其最终pH值。


将所有培养基放入361C培养箱中过夜培养。如果发现任何细菌生长,请将其丢弃。


将相关培养基接种到12管或瓶培养基中,培养2448小时。如果没有不育生长或生长不良。应查明原因并重复接种一次。如果结果仍与之前相同,则该批次培养基应废弃,不能使用。


10.培养基的储存


培养基应保存在阴凉避光处,最好放在普通冰箱中。


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